Unidade de Citometria de Fluxo

EQUIPAMENTOS

Analisadores Celulares:

• FACSDiscover A8: 5 lasers – 355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, e 637 nm; permite a análise espectral de alta dimensão de até 80 parâmetros, com a tecnologia CellView para captação de imagem de células em simultâneo e em tempo real.
• BD FACSCanto II: 3 lasers – 405nm, 488nm e 633nm; permite a análise multiparamétrica de até 8 parâmetros
• FACSCalibur: 2 lasers – 488nm e 633nm; permite análise multiparamétrica de até 4 parâmetros

Separador Celular:

• BD FACSAria III: 4 lasers – 405nm, 488nm, 561nm e 640nm; separação celular e análise multiparamétrica de até 16 parâmetros
• Equipamento totalmente integrado em cabine de biossegurança Classe II Tipo A2

SERVIÇOS

• Manutenção e Controlo de Qualidade dos Equipamentos Científicos
  A Unidade de Citometria de Fluxo implementa protocolos rigorosos de manutenção e controlo de qualidade, assegurando o funcionamento ideal de todos os equipamentos científicos. Estes procedimentos garantem a fiabilidade e reprodutibilidade dos resultados obtidos.
• Análise Celular e Citometria de Fluxo com Imagem
  O serviço de análise celular está disponível 24 horas por dia, 7 dias por semana para investigadores devidamente treinados, mediante reserva no sistema de marcação online. A infraestrutura inclui tecnologia avançada que permite uma caracterização celular detalhada e complexa.
• Separação Celular 
  O serviço de purificação e separação celular está disponível para marcação de segunda a sexta-feira, das 10h às 17h. A separação é realizada por técnicos especializados, garantindo elevada precisão e viabilidade celular. As reservas devem ser efetuadas através do sistema online.
• Formação em Citometria de Fluxo 
  A Unidade oferece sessões teóricas e práticas de elevada qualidade a todos os utilizadores. A formação abrange desde os princípios e fundamentos de Citometria bem como aplicações, incluindo técnicas de separação celular e análise de dados. Os cursos são adaptados a diferentes níveis de experiência, desde iniciantes a utilizadores avançados.
• Análise de Dados
  Oferecemos suporte especializado na análise de dados de Citometria de Fluxo, incluindo o acesso a uma estação de trabalho equipada com FlowJo com recurso a algoritmos avançados que permitem análises de alta dimensionalidade, facilitando a identificação de subpopulações celulares complexas. Além disso, disponibilizamos apoio personalizado para garantir maior eficiência e rigor na interpretação dos resultados.
• Consultoria em Experiências de Citometria de Fluxo
  Prestamos aconselhamento especializado em todas as etapas dos projetos de Citometria de Fluxo, desde o planeamento experimental, desenho e otimização de painéis, preparação de amostras, análise de dados até à apresentação dos resultados. A consultoria é personalizada para maximizar a qualidade e o impacto das investigações.

Outros serviços:

• Imunofenotipagem multidimensional para a caracterização de biomarcadores celulares
  Este serviço fornece acesso à tecnologia de citometria de fluxo espectral de última geração para a caracterização imunológica e funcional de populações celulares complexas. Através da imunofenotipagem multidimensional, é possível analisar fenótipos e estados de células com alta precisão e detalhe, permitindo a identificação e validação de biomarcadores celulares relevantes em certos contextos como resposta imunitária, toxicidade ambiental e investigação clínica. Integrado numa infraestrutura de investigação avançada, o serviço combina tecnologia de ponta com consultoria científica para apoiar projetos em toda a investigação translacional.
• Caracterização multidimensional e identificação de biomarcadores celulares com análise de imagem integrada
  Este serviço oferece uma caracterização detalhada e integrada de fenótipos celulares, combinando a análise multiparamétrica de marcadores fluorescentes com dados de imagens celulares de alta resolução. Esta abordagem permite a identificação de subpopulações raras, estados funcionais complexos e dinâmicas celulares que não são detectáveis usando métodos convencionais. Como resultado, os investigadores podem obter uma visão abrangente da heterogeneidade celular e dos processos biológicos em investigação.
  Principais aplicações:
  - Análise aprofundada de populações de células em amostras humanas e modelos animais;
  - Descoberta e validação de biomarcadores relacionados com respostas imunitárias, progressão de doenças e exposição ambiental;
  - Monitorização de eventos celulares dinâmicos e interações célula-célula em contextos fisiológicos e patológicos.
  A tecnologia de ponta BD FACSDiscover™ A8 oferece uma capacidade sem precedentes de analisar até 80 parâmetros celulares simultaneamente, combinando fluorescência com análise de imagens de alta complexidade. Essa integração única permite uma caracterização abrangente das populações celulares nos níveis fenotípico, morfológico e funcional, expandindo significativamente o potencial de identificar biomarcadores complexos e descobrir mecanismos celulares com maior precisão.
• Análise funcional multiparamétrica de células
  Este serviço oferece uma abordagem abrangente para a análise funcional de células em diversos contextos biológicos. Parâmetros como viabilidade, apoptose, proliferação, ciclo celular, metabolismo, ativação de vias de sinalização e produção de citocinas são avaliados utilizando metodologias multiparamétricas que fornecem uma leitura integrada da função celular. A deteção intracelular de citocinas por citometria de fluxo permite traçar o perfil dos padrões de secreção em resposta a estímulos específicos, aprimorando a avaliação funcional e fornecendo insights críticos sobre a atividade imunológica. Essa caracterização detalhada ajuda a detetar alterações funcionais discretas, mas significativas, contribuindo para uma melhor compreensão dos mecanismos de resposta e auxiliando na identificação de potenciais biomarcadores funcionais em contextos como imunotoxicidade, inflamação, infeção ou resposta a medicamentos.
  Principais aplicações:
  - Estudo das respostas imunitárias funcionais em condições basais e estimuladas;
  - Avaliação dos efeitos imunotóxicos ou pró-inflamatórios de compostos ambientais;
  - Apoio à caracterização da atividade funcional e dos efeitos imunomoduladores de imunoterapias, vacinas ou agentes biológicos;
  - Análise das alterações morfológicas associadas a estados funcionais específicos utilizando imagens celulares de alta resolução.
  A análise funcional é realizada de forma integrada e multiparamétrica, permitindo a medição simultânea de parâmetros fenotípicos e funcionais. A inclusão da análise baseada em imagens adiciona outra camada de resolução, permitindo a visualização de alterações morfológicas ligadas a estados celulares, tais como apoptose, ativação ou proliferação. Esta abordagem integrada aumenta a sensibilidade e a precisão na deteção de alterações funcionais subtis, mesmo em populações de células raras ou heterogéneas.
• Desenvolvimento de painéis personalizados e isolamento celular para caracterização avançada de células 
  Oferecemos suporte especializado no projeto, desenvolvimento e otimização de painéis personalizados para citometria de fluxo de alta dimensão, adaptados aos objetivos específicos de cada projeto. Este serviço inclui seleção estratégica de marcadores, avaliação da compatibilidade de fluorocromos, otimização de protocolos de coloração e permeabilização e orientação técnico-científica durante todo o processo experimental. Os painéis são projetados para integrar marcadores de superfície, intracelulares e funcionais, permitindo uma caracterização abrangente e de alta resolução, mesmo de populações de células raras ou em contextos biológicos complexos. Além disso, subpopulações de células específicas podem ser isoladas para ensaios funcionais in vitro subsequentes, incluindo a sua resposta a estímulos imunológicos, terapêuticos ou ambientais.
  Principais aplicações:
  - Desenvolvimento de painéis personalizados para estudos em imunologia, oncologia, neuroinflamação, metabolismo ou toxicologia ambiental;
  - Integração de marcadores estabelecidos com alvos exploratórios, incluindo suporte à validação técnica;
  - Isolamento de populações de células específicas para ensaios funcionais ou análises posteriores;
  - Design de painéis adequados para estudos translacionais, incluindo modelos animais e amostras humanas.
  Este serviço aproveita a flexibilidade de uma plataforma de citometria de fluxo de última geração, capaz de analisar até 80 parâmetros celulares num único ensaio. Esta capacidade permite projetos experimentais altamente complexos e personalizados, integrando marcadores fenotípicos, funcionais e morfológicos com resolução excecional. O suporte de especialistas garante o desenvolvimento robusto e eficiente de cada painel de acordo com as necessidades específicas de cada projeto de investigação.

Registo e Formação

• Todos os novos utilizadores devem registar-se no sistema Agendo Science https://fcm.agendoscience.com/) e solicitar permissão antes de utilizar os equipamentos pela primeira vez.
• Após aprovação, é obrigatória uma sessão de treino para permitir o uso autónomo dos citómetros analisadores (FACSCantoII e FACSCalibur).
• Para assistência adicional após o treino, os utilizadores podem solicitar suporte ao agendar no Agendo.

Utilização de Equipamentos

• Só o utilizador que fez a reserva pode utilizar o equipamento; é proibido reservar para terceiros.
• O uso sem reserva prévia não é permitido e será monitorizado pela equipa.
• Todos os utilizadores devem seguir as orientações de manutenção e biossegurança disponíveis na intranet NMS Research.
• As mesmas regras aplicam-se a utilizadores externos. A lista de preços está disponível no Agendo.
• Separação Celular (FACSAriaIII): As reservas para separação celular são feitas por pré-reserva, com envio de informações detalhadas para configuração do equipamento. A confirmação será enviada por e-mail.
• Qualquer anomalia com algum equipamento deve ser reportada para flowcytometry.facility@nms.unl.pt.

Agradecimentos e Publicações

• É obrigatório agradecer à Unidade em todas as publicações ou apresentações que utilizem os equipamentos ou serviços.
• Exemplo de agradecimento: "A análise de citometria de fluxo / separação de células foi realizada na Infraestrutura de Citometria de Fluxo da NMS."
• Se a equipa da Infraestrutura tiver contribuído significativamente no planeamento ou análise dos resultados, a coautoria na publicação deve ser considerada.

A Infraestrutura de Citometria de Fluxo da NOVA Medical School está profundamente integrada em redes científicas nacionais e internacionais, promovendo a partilha de conhecimento e o desenvolvimento de novas competências na área da Citometria de Fluxo.

• FLxFlow - Lisbon Flow Cytometry Network
  A Coordenadora Executiva da Unidade é fundadora desta rede, que tem como objetivo fomentar a colaboração entre instituições em Lisboa, promovendo a partilha de boas práticas e a otimização de recursos. No âmbito da FLxFlow, a Unidade participa ativamente na organização de cursos e conferências internacionais, contribuindo para a formação contínua de investigadores e técnicos na área.
• CoLife Alliance
  A Unidade é parte integrante da CoLife, uma aliança estabelecida entre seis institutos de investigação em ciências da vida localizados em Lisboa e Oeiras. Esta aliança visa maximizar os recursos disponíveis, partilhando infraestruturas, serviços e conhecimento científico. A colaboração entre os institutos promove sinergias que impulsionam a inovação, a partilha de equipamentos e o desenvolvimento de projetos científicos conjuntos.
• Membro da Sociedade Internacional de Citometria (ISAC)
  A Coordenadora Executiva é membro da International Society for Advancement of Cytometry (ISAC), uma das principais organizações mundiais dedicadas ao avanço da Citometria de Fluxo. Esta afiliação permite o acesso a programas de formação avançada, redes de colaboração internacional e as mais recentes inovações na área.
• Membro da Sociedade Ibérica de Citometria (SIC)
  A participação na Sociedade Ibérica de Citometria (SIC) reforça o compromisso da Unidade com o desenvolvimento da Citometria na Península Ibérica. Esta sociedade promove a partilha de conhecimento técnico e científico entre profissionais de Portugal e Espanha, incentivando a colaboração transfronteiriça.
• CTLS - Core Technologies for Life Sciences